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Abcam限量版实验程序手册英文版下载

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  • 文件类型:PDF文档
  • 文件大小:8M
  • 更新日期:2012-05-18
  • 浏览次数:170   下载次数:4
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详细介绍

Contents
Protocols
SECTION 1: Antibodies and antibody structure . . . . . . .3
SECTION 2: Various formats of antibody and . . . . . . . . .6
antibody purification
SECTION 3: Choosing an antibody and antibody dilution . . .7
SECTION 4: Fluorescence . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9
4.1 How single fluorochromes work . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9
4.2 How tandem dyes work . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9
4.3 Fluorochrome table (excitation and emission wavelengths) . . .11
SECTION 5: Western blot . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13
5.1 Sample preparation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15
Lysis buffers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15
Protease and phosphatase inhibitors . . . . . . . . . . . . . . .16
Preparation of lysate from cell culture . . . . . . . . . . . . . . .16
Preparation of lysate from tissues . . . . . . . . . . . . . . . . . .16
Determination of protein concentration . . . . . . . . . . . . . .17
Preparation of samples for loading into gels . . . . . . . . . .17
5.2 Electrophoresis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Preparation of PAGE gels . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Positive controls . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
Molecular weight markers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
Loading samples and running the gel . . . . . . . . . . . . . . .19
Use of loading controls . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
5.3 Transfer of proteins and staining . . . . . . . . . . . . . . .20
Visualization of proteins in gels . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Transfer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Visualization of proteins in membranes: Ponceau Red . . . . .22
Blocking the membrane . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Incubation with the primary antibody . . . . . . . . . . . . . . . .22
Incubation with the secondary antibody . . . . . . . . . . . . .22
Development methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23
5.4 Western blot references . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23
5.5 Troubleshooting tips – Western blotting . . . . . . . . .24
SECTION 6: Immunohistochemistry . . . . . . . . . . . . . . . .27
6.1 IHC-Paraffin embedded . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27
6.1.1 Optimizing a new antibody for IHC-P . . . . . . . . . .29
6.1.2 Deparaffinization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .29
6.1.3 Antigen retrieval . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
6.1.4 Immunostaining and detection protocol . . . . . . . . .33
6.1.5 Resources . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
6.2 IHC-Frozen sections (IHC-Fr) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
6.3 Immunocytochemistry (ICC) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
6.4 IHC and ICC fixation and permeabilization tips . . . . . .38
6.5 Perfusion fixation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
6.6 Mouse on mouse staining tips . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
6.7 Troubleshooting tips – IHC and ICC . . . . . . . . . . . . . . .42
SECTION 7: ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
7.1 Indirect ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
7.2 Direct ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
7.3 Sandwich ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
7.4 Troubleshooting tips - ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
SECTION 8: Flow Cytometry (introduction) . . . . . . . . . .53
8.1 Recommended controls for flow cytometry/FACs . . . .55
8.2 Direct Flow cytometry . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .56
8.3 Indirect Flow cytometry . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57
8.4 Intracellular flow cytometry . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58
8.5 Flow cytometry troubleshooting . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
SECTION 9: Immunoprecipitation . . . . . . . . . . . . . . . . . .63
9.1 Lysis buffers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .63
9.2 Crosslinking antibody to the beads . . . . . . . . . . . . . . .67
9.3 Using IgM antibodies for IP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .68
9.4 Troubleshooting tips - IP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69
SECTION 10: ChIP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
10.1 X-ChIP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
10.2 Troubleshooting tips - ChIP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .76
SECTION 11: Buffers and stock solutions . . . . . . . . . . .77
11.1 Standard PBS, TBS, TBS Tween . . . . . . . . . . . . . . . .77
11.2 Western blot . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .77
11.3 IHC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .79
11.4 ELISA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .80
11.5 Flow Cytometry . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .80
11.6 IP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .80
11.7 ChIP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .80
SECTION 12: Antibody storage guide . . . . . . . . . . . . . .82
Welcome to Abcam
About Abcam . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1
Benefits of an Abcam account . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2
Abreviews® and Abpoints® . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2
Technical help
Online resources at Abcam . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .84
Product datasheet guide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .84
Online protocols . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .85
Online poster library . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .85
Ordering and contact details
Contact details . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .86
Local offices and distributors . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .87
Required information for ordering . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .88
Abcam’s terms and conditions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .89

 
 
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